| 猪圆环病毒2型Rep蛋白基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 李文良,毛立,张纹纹,王小敏,茅爱华,甘源,江杰元.猪圆环病毒2型Rep蛋白基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[J].中国兽医学报,2013,33(8). |
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| 作者姓名： | 李文良 毛立 张纹纹 王小敏 茅爱华 甘源 江杰元 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014 |
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| 基金项目： | 江苏省农业科技自主创新基金资助项目(SCX |
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| 摘 要： | 采用PCR方法扩增猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白基因,克隆入原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE检测目的蛋白得到成功表达,采用His标签单抗和PCV-2阳性猪血清进行Western blot鉴定表明重组蛋白具有良好的抗原性.利用纯化的重组蛋白rRep作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法.抗原最适包被质量浓度为1 mg/L(0.1 μg/孔),待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000.用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清,结果均为阴性；批内和批间重复试验变异系数分别为＜5％和＜10％,表明本方法具有较好的特异性和重复性.应用rRep-ELISA对113份血清样品进行检测,与rCap-ELISA结果比较,rRep-ELISA检测阳性率为50.44％(57/113),略低于后者的54.87％(62/113),2种方法检测符合率为88.5％(100/113),具有较好的一致性.这为PCV-2感染的流行病学调查和新型ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础.
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| 关 键 词： | PCV-2 Rep蛋白 原核表达 ELISA |
Prokaryotic expression of Rep protein gene of porcine circovirus type 2 and establishment of an indirect ELISA for serum antibody detection |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCV-2 Rep protein prokaryotic expression ELISA |
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