| 丝瓜ISSR反应体系的优化 |
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| 引用本文： | 叶新如,朱海生,温庆放,刘建汀,王彬,陈敏氡,张前荣.丝瓜ISSR反应体系的优化[J].分子植物育种,2018(5). |
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| 作者姓名： | 叶新如 朱海生 温庆放 刘建汀 王彬 陈敏氡 张前荣 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院作物研究所;福建省农业科学院蔬菜研究中心;福建省蔬菜工程技术研究中心 |
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| 摘 要： | 以丝瓜基因组DNA为模板,对ISSR反应中主要5个影响因素Mg~(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度,建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为:25μL ISSR体系:50 ng DNA,0.2 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.4μmol/L的单条引物,2.5μL 10×Buffer,2.0 mmol/L Mg~(2+)。在此基础上,对12个引物的退火温度进行优化。最终选用60份丝瓜品种对所确定的扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高和重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的ISSR分子标记为丝瓜种质资源的鉴定、分类和丝瓜的杂交育种提供参考依据。
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