| 基因3型猪戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 陈小金,董志珍,赵祥平,王建华,刘洋,王玉玲,陈本龙,肖妍,王乃福,张俊哲.基因3型猪戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫,2016,33(7):72-77. |
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| 作者姓名： | 陈小金 董志珍 赵祥平 王建华 刘洋 王玉玲 陈本龙 肖妍 王乃福 张俊哲 |
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| 摘 要： | 对GenBank中基因3型猪戊型肝炎病毒(HEV)代表毒株基因进行序列分析,最终选定ORF3基因的部分序列为目的基因,运用生物信息学软件设计特异性引物和探针,扩增获得目的片段,并构建重组载体pUC-19-ORF3。梯度稀释重组质粒制备标准品,初步建立检测基因3型HEV的实时荧光定量PCR方法。对建立的检测方法进行特异性、敏感性和重复性验证。结果表明,标准品浓度在10~8~10~2 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.996。特异性试验结果显示,其它几种常见猪病病原体(猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒)未见典型扩增曲线。敏感性试验证实本方法的最低检测下限为10~1 copies/μL。重复性试验表明该方法对3个标准品检测结果的批内和批间变异系数低于2%。用该方法抽检59份进境猪肉样品,同时用普通RT-PCR方法对这些样品进行符合性试验,结果均为阴性。本研究所建立的检测方法不仅适用于进境猪肉样品中基因3型HEV的监控检测,而且还可用于基因3型HEV的早期临床诊断及分子流行病学调查。
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| 关 键 词： | 猪戊型肝炎病毒 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR |
Establishment of TaqMan Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Swine Hepatitis E Virus Detection |
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| Chen Xiaojin,Dong Zhizhen,Zhao Xiangping,Wang Jianhu,Liu Yang,Wang Yuling,CHen Benlong,Xiao Yan,Wang Naifu,Zhang Junzhe.Establishment of TaqMan Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Swine Hepatitis E Virus Detection[J].China Journal Of Animal Quarantine,2016,33(7):72-77. |
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| Authors: | Chen Xiaojin Dong Zhizhen Zhao Xiangping Wang Jianhu Liu Yang Wang Yuling CHen Benlong Xiao Yan Wang Naifu Zhang Junzhe |
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