| 鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达 |
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| 引用本文： | 谢华杰,张海洁,江礼捷,连俊伟,刘敏,闵天奇,王志强.鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达[J].中国家禽,2018(5). |
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| 作者姓名： | 谢华杰 张海洁 江礼捷 连俊伟 刘敏 闵天奇 王志强 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 摘 要： | 试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ目的基因和真核表达载体pc DNA3.1(+),并将双酶切后的目的基因定向插入表达载体中。经酶切和测序正确后加入c-myc标签。单点突变构建pc DNA3.1(+)-myc/MC3R突变型,用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1(+)-myc/MC3R分别瞬时转染入HEK293T细胞中,流式细胞仪检测野生型和突变型的细胞表面表达和胞内总表达。结果表明,成功构建了鸡MC3R基因野生型和四个突变型(M54L、G104S、L151R和S183S)的真核表达载体,突变型与野生型在HEK293T细胞中的表面表达和胞内总表达没有显著性差异,研究结果为进一步研究c MC3R功能奠定基础。
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