| 大肠杆菌γ-ggt原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt的构建及其蛋白表达 |
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| 引用本文： | 胥俊峰,单建华,赵宁伟,殷志敏.大肠杆菌γ-ggt原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt的构建及其蛋白表达[J].安徽农业科学,2007,35(30):9467-9469. |
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| 作者姓名： | 胥俊峰 单建华 赵宁伟 殷志敏 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046 |
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| 基金项目： | 国家教育部基金项目（2002SWXSBJBC22）. |
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| 摘 要： | 构建大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt及表达与鉴定目的蛋白,为进一步利用该酶催化合成茶氨酸等目的产物奠定了基础。以大肠杆菌DH5α总DNA为模板,用PCR法在γ-ggt编码序列上下游引入酶切位点并扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因;将γ-ggt编码序列克隆入原核表达载体pGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR鉴定重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt,并对插入基因片断测序;重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导后用SDS-PAGE分析表达产物,并经Westernblot鉴定。获得大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶基因,并成功构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化有pGEX-4T-1/γ-ggt工程菌BL21(DE3)经1 g/L乳糖诱导1 h后即开始表达目的蛋白,在诱导6 h后表达蛋白量达到最高,随着时间的延长,目的蛋白没有被降解,此蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot鉴定了此目的蛋白。成功构建了大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt,并进行了目的蛋白的鉴定。
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| 关 键 词： | γ-谷氨酰转肽酶 克隆 表达 |
| 文章编号： | 0517-6611（2007）30-09467-03 |
| 修稿时间： | 2007-07-07 |
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