| 产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备 |
| |
| 引用本文： | 彭小兵,田冬青,李旭妮,彭国瑞,王猛,蒋玉文.产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备[J].中国畜牧兽医,2015,42(8):1950-1955. |
| |
| 作者姓名： | 彭小兵 田冬青 李旭妮 彭国瑞 王猛 蒋玉文 |
| |
| 作者单位： | 中国兽医药品监察所, 北京 100081 |
| |
| 基金项目： | 动物生物制品国家工程研究中心项目——羊腐败梭菌、C型产气荚膜梭菌、D型产气荚膜梭菌三联类毒素研发 |
| |
| 摘 要： | 本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和Hind Ⅲ的双酶切,将得到的1125 bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys宿主菌中,37 ℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1 ku,与预期大小一致。Western blotting结果显示,该重组α毒素蛋白可被A型产气荚膜梭菌定型血清识别,表明该重组α毒素蛋白具备与天然毒素相似的反应原性。重组α毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和超声波裂解沉淀中均有分布,且以包涵体表达为主,表明重组α毒素蛋白可同时在胞外、周质和胞浆表达。小鼠毒力试验结果表明,重组α毒素蛋白不具有毒性。毒素—抗毒素中和试验结果表明,该抗血清具有α毒素特异性。以重组α毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明每1 mL重组α毒素蛋白抗血清可以中和100 MLD的A型毒素。
|
| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌 α毒素 克隆表达 抗血清 |
| 收稿时间： | 2014-12-29 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国畜牧兽医》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国畜牧兽医》下载免费的PDF全文 |
|
