| 海南根瘤菌nodABC基因DNA片段的克隆、测序和功能验证* |
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| 引用本文： | 温尚昆,李小红,王磊,杨苏声.海南根瘤菌nodABC基因DNA片段的克隆、测序和功能验证*[J].农业生物技术学报,2003,11(6):628-632. |
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| 作者姓名： | 温尚昆 李小红 王磊 杨苏声 |
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| 作者单位： | 中国农业大学生物学院微生物学系,农业部农业微生物资源与其应用重点开放实验室,北京,100094 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目(001CB108905)和欧盟科技合作项目(ICA4-CT-2001-10056)资助. |
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| 摘 要： | 从海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)166提取总DNA，用EcoR I酶进行完全酶切和电泳，然后用苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B的nodABC DNA片段作探针进行Southern杂交，发现1条含有nodABC基因DNA片段的阳性条带，大小为2．1-2．5kb。通过电泳回收该DNA片段，用pUCl8作载体连接，并转化大肠杆菌(Eschedchia coli)DH5α，从而构建了含有nodABC的部分基因文库。提取该文库的质粒与nodABC探针做菌落杂交，筛选到nodABC的阳性克隆，称为pUER12。将含有nodABC的DNA片段与EcoR I酶切的pBBR-MCS-5连接，转化大肠杆菌DH5α，获得转化子pBER12。用三亲本杂交方法，把pBERl12转入苜蓿中华根瘤菌AK1657，将其接合子进行结瘤实验，验证了pBER12具有nodABC基因的功能。然后将含有166 nodABC片段的DNA与EcoR I酶切的pGEM-7Z( )连接、测序和进行同源性比较，发现166 nodABC编码的蛋白与苜蓿中华根瘤菌具有高度的同源性。
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| 关 键 词： | 海南根瘤菌 nodABC基因 克隆 测序 功能 |
| 修稿时间： | 2003年3月20日 |
Cloning, Sequencing and Functional Testing of the DNA Fragment Containing nodABC Genes of Rhizobium hainanense |
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