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| 剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段克隆、表达及蛋白检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 刘春,李凯彬,王芳,聂湘平,吴淑勤.剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段克隆、表达及蛋白检测方法的建立[J].中国水产科学,2007,14(6):883-888. |
| 作者姓名： | 刘春 李凯彬 王芳 聂湘平 吴淑勤 |
| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380;上海水产大学,上海,200090 2. 中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380 3. 暨南大学,水生生物研究所,广东,广州,510630 |
| 基金项目： | 科技部社会公益研究项目 |
| 摘 要： | 本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法.根据已发表的底鳉(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1 118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底鳉和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%.在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白.表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后,SDS-PAGE分析有29 kD的表达蛋白产生,与预期相符.以重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清.雌激素(β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后,用重组蛋白抗血清作一抗,进行Westernblot分析.结果表明,该抗血清能与剑尾鱼卵黄蛋白原特异结合,可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测.卵黄蛋白原是环境雌激素研究中较为特异、灵敏的生物标志物,剑尾鱼卵黄蛋白原检测方法的建立,为剑尾鱼环境监测应用提供良好基础. |
| 关 键 词： | 剑尾鱼 卵黄蛋白原 原核表达 检测 |
| 文章编号： | 1005-8737-(2007)06-0883-06 |
| 修稿时间： | 2007年3月7日 |
Vitellogenin of swordtail fish Xiphophorus helleri:cloning, expression and an assay development |
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| LIU Chun,LI Kai-bin,WANG Fang,NIE Xiang-ping,WU Shu-qin.Vitellogenin of swordtail fish Xiphophorus helleri:cloning, expression and an assay development[J].Journal of Fishery Sciences of China,2007,14(6):883-888. | |
| Authors: | LIU Chun LI Kai-bin WANG Fang NIE Xiang-ping WU Shu-qin |
| Abstract: | |
| Keywords: | Xiphophorus helleri vitellogenin prokaryotic expression detection |
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