| 新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 潘伊微,贺艳艳,潘辉,贾山岭,李莲瑞.新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备[J].新疆农业科学,2013,50(3):572. |
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| 作者姓名： | 潘伊微 贺艳艳 潘辉 贾山岭 李莲瑞 |
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| 作者单位： | 塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔,843300;塔里木大学动物科学学院 新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室 新疆阿拉尔843300 |
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| 摘 要： | 目的]克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析.方法]采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达.用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.结果]重组质粒在BI21 (DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在.用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Westem-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别.结论]表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性.
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| 收稿时间： | 2013-03-25 |
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