| 猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定 |
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| 引用本文： | 任晓峰,窦秀静,郝雅环,孙刘妹,魏小宁.猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定[J].东北农业大学学报,2014(12). |
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| 作者姓名： | 任晓峰 窦秀静 郝雅环 孙刘妹 魏小宁 |
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| 作者单位： | 东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31300758;31340003)；“十二五”国家科技支撑项目(2013BAD12B04)；哈尔滨科学技术局项目(RC2012XK002003)；中国教育部重点项目 |
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| 摘 要： | 为开展猪轮状病毒（PRV）及其VP4蛋白相关特性研究，参照GenBank所收录的猪轮状病毒JL94、OSU等株序列设计一对特异性引物，从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209株扩增约2330 bp VP4全长基因，并成功构建重组质粒VP4-pMD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明，DN30209株VP4全基因长2331 bp，与参考株JL94的核苷酸同源性为99.7%，氨基酸同源性为99.5%。将VP4基因连接到pGEX-6P-1原核表达载体中，构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-pGEX-6P-1。阳性重组质粒转化Rosetta宿主菌感受态细胞中，经IPTG诱导，获得以包涵体形式表达的重组蛋白，融合蛋白大小约为112 ku，与预期大小相符。回收、纯化并复性该蛋白，将其作为免疫原免疫大白兔，制备兔抗PRV VP4全长蛋白多克隆抗体，间接ELISA测定多抗效价到1??105，间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western blot）检测表明该多抗均可与PRV具有很好的抗原抗体反应性，为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。
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| 关 键 词： | 猪轮状病毒 克隆 原核表达 抗体制备 |
Expression VP4 complete protein and polyclonal antibodies prepara-tion or detection of porcine rotavirus DN30209 strain |
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| REN Xiaofeng,DOU Xiujing,HAO Yahuan,SUN Liumei,WEI Xiaoning.Expression VP4 complete protein and polyclonal antibodies prepara-tion or detection of porcine rotavirus DN30209 strain[J].Journal of Northeast Agricultural University,2014(12). |
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| Authors: | REN Xiaofeng DOU Xiujing HAO Yahuan SUN Liumei WEI Xiaoning |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PRV clone prokaryotic expression antibody preparation |
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