| 茶炭疽菌中CRISPR/Cas9敲除系统构建 |
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| 引用本文： | 罗可,王珞,刘思睿,张卫民,姚明勇,潘雪珍,刘辉.茶炭疽菌中CRISPR/Cas9敲除系统构建[J].贵州农业科学,2023(12):66-74. |
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| 作者姓名： | 罗可 王珞 刘思睿 张卫民 姚明勇 潘雪珍 刘辉 |
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| 作者单位： | 1. 贵州省生物技术研究所/贵州省农业生物技术重点实验室;2. 清镇红枫山韵茶场有限公司;3. 贵州发来地农业科技有限公司 |
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| 摘 要： | 【目的】以调控茶树炭疽病菌(Colletotrichum camelliae)中的植物真菌毒素(Solanapyrones)合成的CcSOL4为例，构建CRISPR-Cas9的基因敲除载体系统，为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶炭疽菌中的应用奠定基础。【方法】通过对转录因子CcSOL4的基因序列分析，选择5个靶点以PCBC载体为模板扩增目的片段，再与表达载体PKSE401发生重组构建基因标记载体。以携带Cas9编码基因的PKSE401双元双靶点载体系统为骨架，以PCBC载体为模板扩增相应的sgRNA,运用Overlapping PCR以及Golden Gate Cloning技术构建针对炭疽病的双靶点和三靶点CRISPR/Cas9编辑载体。【结果】双靶点载体片段及三靶点载体片段扩增后大小为650～750 bp,将上述PCR片段连入载体PKSE401,双靶点载体1Sol4和2Sol4经阳性鉴定得到650 bp片段，三靶点载体3Sol4经阳性鉴定后得到1 200 bp的片段。【结论】重组载体构建成功，并建立了茶炭疽菌C.camelliae的CRISPR/Cas9敲除体系。
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| 关 键 词： | 山茶刺盘孢菌 CRISPR/Cas9 CcSOL4 基因编辑 |
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