| 茶树CCoAOMT原核表达及酶促条件优化 |
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| 引用本文： | 唐倩,陈丝,欧淑琼,李勤,李娟,王坤波.茶树CCoAOMT原核表达及酶促条件优化[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2020,46(5):533-537. |
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| 作者姓名： | 唐倩 陈丝 欧淑琼 李勤 李娟 王坤波 |
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| 作者单位： | 国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南 长沙 410128;茶学教育部重点实验室,湖南 长沙 410128;湖南农业大学园艺学院,湖南 长沙 410128;国家植物功能成分利用工程技术研究中心,湖南 长沙 410128;茶学教育部重点实验室,湖南 长沙 410128;植物功能成分利用省部共建协同创新中心,湖南 长沙 410128;湖南农业大学园艺学院,湖南 长沙 410128 |
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| 基金项目： | 国家科学技术部重点研发计划课题(2018YFC1604403);湖南省科学技术厅中央引导地方科技发展项目(2019XF5041);湖南省科学技术厅重点研发计划项目(2018NK2031) |
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| 摘 要： | 优化了重组茶树咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶基因(CCoAOMT)在大肠杆菌中的表达,采用Ni–NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为底物,进行体外酶促反应,采用HPLC测定反应产物EGCG3"Me的生成量。结果表明,CCoAOMT在E.coli BL21中能够高效表达,最优条件为诱导温度37 ℃,诱导时间4 h,异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.5 mmol/L;重组蛋白经Ni–NTA亲和层析柱梯度洗脱达到了较好的纯化效果;重组酶在体外能够催化EGCG,合成EGCG3"Me,底物EGCG最佳浓度为0.05 mmol/L,最适温度为37 ℃,最适pH值为4。
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| 关 键 词： | 茶树 咖啡酰辅酶A—O—甲基转移酶 原核表达 纯化 酶促合成 |
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