| 东北七鳃鳗NF-κB基因启动子的构建及活性 |
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| 引用本文： | 周泽斌,丁少青,程沛茹,任建峰,李伟明,张庆华.东北七鳃鳗NF-κB基因启动子的构建及活性[J].水产学报,2020,44(11):1804-1812. |
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| 作者姓名： | 周泽斌 丁少青 程沛茹 任建峰 李伟明 张庆华 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学,水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海 201306;上海海洋大学,国家海洋生物科学国际联合研究中心,上海 201306;上海海洋大学,水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心,上海 201306;密歇根州立大学渔业与野生生物系,密歇根 东兰辛 48824 |
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| 基金项目： | 教育部留学回国人员科研启动基金（D-8002-15-0042）；中美海洋研究中心基金 (A1-0209-15-0806)；水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究 （A1-3201-19-3013） |
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| 摘 要： | 核转录因子NF-kB(Nuclear factor kappa B)对机体的免疫反应、炎症反应等起重要的调控作用。为了获得NF-kB基因启动子的活性报告基因，进一步研究原始脊椎动物免疫应答的机制，我们根据此前克隆得到的东北七鳃鳗(Lethenteron morii)NF-kB基因cds序列，以与东北七鳃鳗高度同源的日本七鳃鳗(Lampetra japonica)同源基因 5’上游启动子特征序列为模板设计引物，克隆获得了东北七鳃鳗NF-kB启动子序列，该序列全长3169 bp，提交至NCBI Genbank获得登录号MN368861。经AliBaba2.1软件预测该序列包含CREB (cgtgacttca)、Oct-1 (aatatgaatt)、GATA-1 (gaacctatct)、AP-1 (ggttgagtca)、NF-kappa B (ctttcctgtt)、IRF-1 (tttcctgttc)、Sp-1 (tgtgaggggt)、c-Jun (acgtgacttc)和c-Fos (ggttgagtca)等多个转录因子结合位点，并包含TATA box转录核心元件。通过MethPrimer软件预测在序列1207-1402 bp处存在CG含量大于50%，长196 bp的CpG岛。利用双酶切技术构建了pGL3-NF-kB-pro重组质粒，并将其转染至人胚肾细胞系（Human embryonal kidney, HEK293T）和鲤鱼上皮瘤细胞系（Epithelioma papulosum cyprinid, EPC）中。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示该片段序列在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有启动子活性，同时在HEK293T中经过Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）的配体LPS刺激后启动子活性显著上升。本研究成功构建了东北七鳃鳗NF-kB启动子报告基因，并在不同细胞系中证实了其活性。LPS刺激后的检测结果揭示东北七鳃鳗NF-kB参与了TLR信号通路的免疫应答。东北七鳃鳗NF-kB报告基因的构建为探究原始脊椎动物免疫系统信号传导机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 东北七鳃鳗 NF-κB 报告基因 启动子转录活性 |
| 收稿时间： | 2020/1/2 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/4/8 0:00:00 |
CONSTRACTION AND ACTIVITY OF NF-kB PROMOTER REPORTER IN NORTHEAST CHINESE LAMPREY (LETHENTERON MORII) |
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| ZHOU Zebin,DING Shaoqing,CHENG Peiru,REN Jianfeng,LI Weiming,ZHANG Qinghua.CONSTRACTION AND ACTIVITY OF NF-kB PROMOTER REPORTER IN NORTHEAST CHINESE LAMPREY (LETHENTERON MORII)[J].Journal of Fisheries of China,2020,44(11):1804-1812. |
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| Authors: | ZHOU Zebin DING Shaoqing CHENG Peiru REN Jianfeng LI Weiming ZHANG Qinghua |
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| Institution: | Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Ministry of Education, Shanghai Ocean University; International Research Center for Marine Biosciences, Ministry of Science and Technology, Shanghai Ocean University;Shanghai Collaborative Innovation for Aquatic Animal Genetics and Breeding;,,,,,College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lethenteron morii NF-kB Reporter gene Promoter activity |
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