| 抗真菌KP4蛋白的原核表达载体构建与表达 |
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| 引用本文： | 孔冉,冯翠莲,李晓君,郭婷,张树珍.抗真菌KP4蛋白的原核表达载体构建与表达[J].江苏农业科学,2012,40(8):11-14. |
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| 作者姓名： | 孔冉 冯翠莲 李晓君 郭婷 张树珍 |
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| 作者单位： | 1. 海南大学农学院,海南海口570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口,571101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号:31101197);现代农业产业技术体系建设专项基金(编号:nycytx-24);中央级公益性科研院所基本科研业务费(编号:ITBBZD0724) |
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| 摘 要： | 为制备KP4的多克隆抗体,将KP4编码框克隆到pMD19-T中,载体经测序后,亚克隆到原核表达载体pET32a中,获得了KP4的原核表达载体PET-KP4.将构建成功的KP4原核表达载体转化宿主菌BL21( DE3)并用IPTG对重组菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析诱导后重组菌的总蛋白显示,融合蛋白大小约为31 ku,以包涵体形式存在;对融合蛋白的表达条件进行了优化,KP4大量表达最佳培养温度为37℃,诱导剂IPTG的最佳浓度为1.0 mmol/L,最佳诱导培养时间为8h;对目标蛋白进行包涵体破碎,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析对总蛋白进行了纯化.SDS-PAGE电泳分析与蛋白浓度测定结果显示,目的蛋白纯度好,浓度达到了236μg/mL.
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| 关 键 词： | KP4 包涵体 温度 IPTG 纯化 |
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