| 重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定 |
| |
| 引用本文： | 范锋,徐正中,倪谷音,毛爱民,杨卫冲,陈祥.重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定[J].畜牧与兽医,2014(3):76-79. |
| |
| 作者姓名： | 范锋 徐正中 倪谷音 毛爱民 杨卫冲 陈祥 |
| |
| 作者单位： | 无锡市动物疫病预防控制中心;扬州大学生物科学与技术学院;无锡市动物园管理处 |
| |
| 基金项目： | 江苏省农业三新工程(No.SXGC(No.2012)032,No.SXGC(No.2012)402) |
| |
| 摘 要： | 根据黑白花奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γcDNA,并将其定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序后,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别表达出大小在23和43 ku左右的融合蛋白。通过对诱导剂的浓度、诱导起始时间、诱导持续时间的筛选,对表达条件进行了优化,BL21(DE3)/pET-30a(+)-BovIFN-γ与BL21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融合蛋白的相对表达量最高时可分别达到菌体总蛋白的60%和45%左右。使用纯化的融合蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ进行细胞病变抑制试验,证实表达产物具有较高抗病毒感染活性,在牛肾细胞(MDBK)上抑制水疱性口炎病毒的活性分别为2.15×107和1.21×105U·mg-1。
|
| 关 键 词： | 奶牛 γ-干扰素 克隆 原核表达 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
