| 马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 白宇,童铁钢,刘光亮,肖一红,王群,徐树兰,张维军,吴东来.马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备[J].中国预防兽医学报,2007,29(11):878-882. |
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| 作者姓名： | 白宇 童铁钢 刘光亮 肖一红 王群 徐树兰 张维军 吴东来 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 |
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| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金项目（ZJN.0602-01） |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 马γ-干扰素 表达 纯化 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1008-0589（2007）11-0878-05 |
| 修稿时间： | 2007-03-01 |
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