| 猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘辉,熊金凤,邹浩勇,陈杨,杨维红,何启盖.猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立[J].华中农业大学学报,2008,27(1):12-18. |
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| 作者姓名： | 刘辉 熊金凤 邹浩勇 陈杨 杨维红 何启盖 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/预防兽医学湖北省重点实验室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划
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华中农业大学留学回国人员科研启动基金 |
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| 摘 要： | 根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测.
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| 关 键 词： | 多重RT-PCR 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 乙型脑炎病毒 |
| 文章编号： | 1000-2421(2008)01-0012-07 |
| 修稿时间： | 2007年10月14 |
Development of Multiplex RT-PCR to Detect Classical Swine Fever Virus(CSFV),Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV) and Japanese Encephalitis Virus(JEV) |
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| LIU Hui XIONG Jin-feng ZOU Hao-yong CHEN Yang YANG Wei-hong HE Qi-gai.Development of Multiplex RT-PCR to Detect Classical Swine Fever Virus(CSFV),Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV) and Japanese Encephalitis Virus(JEV)[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2008,27(1):12-18. |
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| Authors: | LIU Hui XIONG Jin-feng ZOU Hao-yong CHEN Yang YANG Wei-hong HE Qi-gai |
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| Institution: | The Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine of Hubei Province/State Key Laboratory of Agricultural Microbiology;Huazhong Agricultural University;Wuhan 430070;China |
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| Abstract: | This paper described a multiplex RT-PCR to rapidly diagnose the co-infection in samples from pig with reproductive failure symptoms.Three sets of primers were designed,respectively,targeting to the conserved sequences in E2 gene of classical swine fever virus(CSFV),a domain encompassing partial ORF6,ORF7 and 3-terminus UTR of porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) and E gene of Japanese encephalitis virus(JEV).The expected sizes of RT-PCR amplicons were 288 bp for CSFV,430 bp for PRRSV a... |
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| Keywords: | multiplex RT-PCR classical swine fever virus porcine reproductive and respiratory syndrome virus Japanese encephalitis virus |
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