| 坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 于春梅,刁有祥,唐熠,崔京腾,高绪慧,张颖,鞠小军,武利利.坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立[J].中国农业科学,2012,45(21):4492-4500. |
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| 作者姓名： | 于春梅 刁有祥 唐熠 崔京腾 高绪慧 张颖 鞠小军 武利利 |
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| 作者单位： | 1.山东农业大学动物科技学院 山东泰安 271018 |
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| 基金项目： | 国家水禽产业技术体系项目（CARS-43-34）、山东省农业重大应用技术创新项目 |
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| 摘 要： | 【目的】利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法。【方法】针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物，同时设计1对扩增内参基因β-actin引物，将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒，经筛选、鉴定纯化后，倍比稀释作为质控样品，用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建，并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99 以上, 检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA；特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线；批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%；用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测，病毒RNA的检出率为100%。【结论】本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法，为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法。
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| 关 键 词： | 坦布苏病毒 NS5基因 E基因 SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR 相对定量 |
| 收稿时间： | 2012-03-23 |
Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Tembusu Virus |
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| YU Chun-Mei,DIAO You-Xiang,TANG Yi,CUI Jing-Teng,GAO Xu-Hui,ZHANG Ying,JU Xiao-Jun,WU Li-Li.Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Tembusu Virus[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(21):4492-4500. |
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| Authors: | YU Chun-Mei DIAO You-Xiang TANG Yi CUI Jing-Teng GAO Xu-Hui ZHANG Ying JU Xiao-Jun WU Li-Li |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tembusu virus Tembusu virus NS5 gene E gene SYBR GreenⅠ real-time quantitative PCR assay relative quantitative |
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