| 鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 王巧萍,严红亚,李珂,朱鹤然,元正菊,常志顺,张以芳,信爱国.鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用[J].中国动物检疫,2021,38(11):124-130. |
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| 作者姓名： | 王巧萍 严红亚 李珂 朱鹤然 元正菊 常志顺 张以芳 信爱国 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术（水禽）体系资助项目（CARS-42）；云南省廖明专家工作站（202105AF150077）；云南省重大科技专项（202102AE090029） |
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| 摘 要： | 为建立鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus，DTMUV）荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测方法，对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针，使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY?-T1载体上构建重组质粒，提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线，用SYBR Green I法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增，并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示：MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3，其引物没有非特异性扩增；对于其他阳性样本，如鸭肝炎病毒（DHV）、新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）等抗原无扩增曲线，只能检出DTMUV；qRT-PCR敏感性可达3×102 copies/μL，是普通RT-PCR的10 000倍；批内和批间重复性试验变异系数（CV）为0.08%~0.49%，均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织，应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品，而普通RT-PCR检出10份，两者的阳性率分别为60%（12/20）和50%（10/20）。结果表明，本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法，其标准曲线线性关系显著，特异性强，与其他禽源性病原无交叉反应性，敏感性和重复性良好，敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高，更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。
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| 关 键 词： | 鸭坦布苏病毒 NS5基因 荧光定量RT-PCR MGB探针 |
Establishment and Application of a Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Duck Tembusu Virus |
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| Wang Qiaoping,Yan Hongy,Li Ke,Zhu Heran,Yuan Zhengju,Chang Zhishun,Zhang Yifang,Xin Aiguo.Establishment and Application of a Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Duck Tembusu Virus[J].China Journal Of Animal Quarantine,2021,38(11):124-130. |
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| Authors: | Wang Qiaoping Yan Hongy Li Ke Zhu Heran Yuan Zhengju Chang Zhishun Zhang Yifang Xin Aiguo |
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