| 猪生殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区序列的反向遗传操作 |
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| 引用本文： | 高飞,姚火春,孙志,王金勇,袁世山.猪生殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区序列的反向遗传操作[J].中国兽医科技,2007,37(8):655-660. |
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| 作者姓名： | 高飞 姚火春 孙志 王金勇 袁世山 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院上海兽医研究所／中国动物卫生与流行病学中心上海分中心农业部动物寄生虫病重点实验室,上海200232 [2]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目（30530580）;国家重点基础研究发展规划（973）专项（2005CB523202） . |
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| 摘 要： | 以猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5′非编码区（5′UTR）和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5′UTR替换为欧洲株的5′UTR,获得全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞。结果显示,pTLNd4产生了细胞病变（CPE）,而pTLV8未产生。通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验。证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5′UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子。
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| 关 键 词： | 猪生殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 体外转录 转染 RNA印迹 |
| 文章编号： | 1673-4696（2007）08-0655-06 |
| 收稿时间： | 2007-04-06 |
| 修稿时间： | 2007-06-27 |
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