| 禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达 |
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| 引用本文： | 葛兆宏,陆广富.禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达[J].中国预防兽医学报,2006,28(4):441-445. |
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| 作者姓名： | 葛兆宏 陆广富 |
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| 作者单位： | 江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏,泰州,225300 |
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| 摘 要： | 根据MONA M．ALY发表的一对引物，5’-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAA GGGCAG A-3’（上游引物），5’-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3’（下游引物），上游引物位于REV—SNV毒株LTR序列上游237bp到267bp，下游引物在499bp到517bp之间，扩增产物总长为281bp。以REV—T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板，进行PCR扩增，提取病毒RNA进行RT—PCR，这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，将其克隆入pGEM—TEasy克隆载体中，经测序，证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REVp30的主要抗原域，用构建成功的表达禽网状内皮增生症p30主要抗原域的原核表达载体pET—p30，转化大肠杆菌BL21，挑取阳性克隆培养，IPTG诱导后裂解菌体作SDS—PAGE分析，出现大小约25Ku的表达产物即融合蛋白TrxA—p30主要抗原域，经Western blot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件：LB培养基，37℃培养，待菌生长至OD600为0．4h～0．6h。用终浓度为0．2mmol／L～0．8mmol／L的IPTG进行诱导，于37℃振荡培养4h～5h，均能高效表达。本研究为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。
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| 关 键 词： | 禽网状内皮增生症病毒 p30蛋白主要抗原域 原核表达系统 |
| 文章编号： | 1008-0589(2006)04-0441-05 |
| 收稿时间： | 2005-03-08 |
| 修稿时间： | 2005年3月8日 |
Detection of reticuloendotheliosis virus infection using PCR or RT-PCR and expression of the major antigenic domain on protein p30 of reticuloendotheliosis virus in E. coli |
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| GE Zhao-hong,LU Guang-fu.Detection of reticuloendotheliosis virus infection using PCR or RT-PCR and expression of the major antigenic domain on protein p30 of reticuloendotheliosis virus in E. coli[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2006,28(4):441-445. |
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| Authors: | GE Zhao-hong LU Guang-fu |
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| Institution: | Jiangsu Animal Husbandry Veterinary College, Taizhou 225300, China |
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| Keywords: | Western blot |
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