| 羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达 |
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| 引用本文： | 于琳琳,贾红,侯绍华,刘丹,丁敏,郭晓宇,朱鸿飞.羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达[J].中国畜牧兽医,2010,37(11). |
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| 作者姓名： | 于琳琳 贾红 侯绍华 刘丹 丁敏 郭晓宇 朱鸿飞 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193;中国农业科学院生物技术研究所,北京,100081
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 |
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| 摘 要： | 本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础.将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d基因串联,插入pTarget载体,获得重组质粒pTarget-EG95-(C3d)3,利用BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切位点将目的基因EG95-(C3d)3克隆至Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBac-Hta中,获得pFastBacHta-EG95-(C3d)3重组质粒,将该重组质粒转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中进行转座重组,获得携带3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组转座子rBacmid-EG95-(C3d)3,转染Sf9昆虫细胞后获得EG95-(C3d)3重组杆状病毒,并表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行重组蛋白的鉴定.同时利用昆虫细胞表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体进行检测.结果表明,获得了EG95-(C3d)3重组杆状病毒,且EG95-(C3d)3重组融合蛋白在Sf9昆虫细胞得到了正确表达,大小约为132 ku,Western blotting鉴定结果显示表达的EG95-(C3d)3重组融合蛋白能与细粒棘球蚴阳性血清产生特异性反应,表明EG95-(C3d)3基因表达产物具有免疫活性.同时表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体有良好的敏感性.EG95-(C3d)3基因在昆虫细胞获得表达,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较,及细粒棘球蚴病的高效检测方法的建立奠定了基础.
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| 关 键 词： | 包虫病 EG95s基因 C3d基因 重组杆状病毒 |
Tandem Expression and Identification of EG95s Gene of Echinococcus granulosus and C3d Gene Using Baculovirus Expression System |
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| YU Lin-lin,JIA Hong,HOU Shao-hua,LIU Dan,DING Min,GUO Xiao-yu,ZHU Hong-fei.Tandem Expression and Identification of EG95s Gene of Echinococcus granulosus and C3d Gene Using Baculovirus Expression System[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2010,37(11). |
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| Authors: | YU Lin-lin JIA Hong HOU Shao-hua LIU Dan DING Min GUO Xiao-yu ZHU Hong-fei |
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