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| 梨属植物ISSR技术体系的建立与优化 | |
| 引用本文： | 张玉星,马艳芝,赵国芳.梨属植物ISSR技术体系的建立与优化[J].中国农学通报,2011,27(6):50-53. |
| 作者姓名： | 张玉星 马艳芝 赵国芳 |
| 作者单位： | 1. 河北农业大学园艺学院河北省梨工程技术研究中心,河北,保定,071001 2. 河北农业大学园艺学院河北省梨工程技术研究中心,河北,保定,071001;唐山师范学院生命科学系,河北,唐山,063000 3. 河北农业大学园艺学院河北省梨工程技术研究中心,河北,保定,071001;北京金泰恒业有限责任公司富地分公司,北京,100031 |
| 摘 要： | 本研究以雪花梨为材料，对ISSR反应体系中的模板用量、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等一些重要参数进行探索和优化，初步建立了稳定的具有广泛适用性的梨属植物ISSR技术的反应体系及扩增程序，即20 μL体系中含1×buffer (内含1.5 mmol? L-1 MgCl2)、模板DNA 40～60 ng、引物浓度为0.2 μmol?L-1、 dNTP 200 μmol?L-1、Taq DNA聚合酶 1U。扩增程序为：94℃ 5 min、退火60s、72℃延伸120 s，然后连续39个循环为94℃ 60s、退火温度(52℃左右)60s 、72℃延伸120s，完成最后一个循环后，在72℃继续延伸10 min，然后在4℃保温，最后通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 |
| 关 键 词： | 渍害指标 渍害指标 特征 江淮地区 冬小麦 |
| 收稿时间： | 2010/5/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/7/10 0:00:00 |
Establishment and Optimization of ISSR Technique in Pyrus L. |
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| Zhang Yuxing,Ma Yanzhiu,Zhao Guofang.Establishment and Optimization of ISSR Technique in Pyrus L.[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2011,27(6):50-53. | |
| Authors: | Zhang Yuxing Ma Yanzhiu Zhao Guofang |
| Institution: | Zhang Yuxing1,Ma Yanzhi1,2,Zhao Guofang1,3(1Bio-control Center of Pear of Hebei Province,College of Horticulture,Agricultural University of Hebei,Baoding Hebei 071001,2Department of Life Science,Tang Shan Normal College,Tangshan Hebei 063000,3Beijing Golden Tide Co. Ltd Fudi Branch,Beijing 100031) |
| Abstract: | In this study,the genome DNA was extracted from Xuehua pear and was used for inter-simple sequence repeat（ISSR） analysis. By evaluating amplification concentrations and conditions,the optimum reaction system of ISSR-PCR forPyrus L. were established in a total volume of 20 μL,containing template DNA 40 ng,1.0 UTaq -DNA polymerase,0.2 μmol/L ISSR primer,200 μmol/L,dNTP,Buffer（Tris-HCl（pH8.3） 10 mmol/L、KCl 50 mmol/L、MgCl2 1.5 mmol/L） . Amplified procedure was programmed for 5 min at 94℃,at annealing temperature for 60s,extension 120 s at 72℃;39 cycles：60 s at 94℃,at annealing temperature（52℃） for 60 s,extension 120 s at 72℃ and then a final extension 72℃ for 10 min after the last cycle and then keep at 4℃. Amplified products were detected by electrophoresis in 1.4 agarose gel（containing 1 μg/mL EB） . |
| Keywords: | Pyrus L ISSR reaction system amplified procedure |
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