| 有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 卢强,丰培金,李莲瑞,付宝权,刘明远.有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库的构建[J].中国兽医学报,2004,24(6):568-570. |
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| 作者姓名： | 卢强 丰培金 李莲瑞 付宝权 刘明远 |
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| 作者单位： | 解放军军需大学,动物科技系,吉林,长春,130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 2 0 0 2 10 ) |
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| 摘 要： | 利用 Stratagene公司 Hybri ZAP- 2 .1建库试剂盒构建了经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞 c DNA文库。采取健康鲤鱼外周血 ,分离白细胞 ,经 L PS、PHA和 Con A分组作用不同时间后 ,分别提取总 RNA,将各组样品混合后 ,以 Oligo(d T)纤维素柱分离纯化 m RNA,经逆转录合成 c DNA的第 1链和第 2链 ,与 Eco R 接头连接 ,酶切后 ,用CHROMA SPIN- 4 0 0柱离心层析纯化 ,与 Hybri ZAP- 2 .1载体连接 ,体外包装后转染 E.coli XL I- Blue宿主菌 ,进行滴度测试和文库扩增。结果构建的经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞 c DNA文库原始库容量为 1.6 7× 10 6 pfu,插入片段长度在 0 .4× 10 3～ 3.0× 10 3bp,重组率为 98.9% ,扩增后的文库滴度为 6 .16× 10 9pfu/m L ,该文库符合 c DNA文库构建的标准 ,为克隆和研究鱼类免疫应答相关基因提供了有效的工具
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| 关 键 词： | 有丝分裂原 鲤鱼 外周血白细胞 cDNA文库 |
| 文章编号： | 1005-4545(2004)06-0568-03 |
| 修稿时间： | 2003年9月15日 |
Construction of cDNA Library of Mitogen Stimulated Carp Peripheral Blood Leucocytes |
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| LU Qiang,FENG Pei-jin,LI Lian-rui,FU Bao-quan,LIU Ming-yuan.Construction of cDNA Library of Mitogen Stimulated Carp Peripheral Blood Leucocytes[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2004,24(6):568-570. |
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| Authors: | LU Qiang FENG Pei-jin LI Lian-rui FU Bao-quan LIU Ming-yuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mitogen Cyprinus carpio L peripheral blood leucocytes cDNA library |
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