| 野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 李松达,蒋亚君,庞忠宝,黄颖,翟文竹,朱鸿飞,赵晓民,贾红.野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立[J].动物医学进展,2024(4):32-39. |
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| 作者姓名： | 李松达 蒋亚君 庞忠宝 黄颖 翟文竹 朱鸿飞 赵晓民 贾红 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;2. 西北农林科技大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2021YFD1801200)；;中国农业技术支持专项(CARS36)； |
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| 摘 要： | 为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法，针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针，优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法，并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示，优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好，对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测，特异性良好；重复性试验结果显示，变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为102 copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件，进行多重ddPCR检测方法的建立，并且对该方法进行评价。结果显示，ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好；特异性及重复性良好；最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 多重荧光定量PCR 微滴式数字PCR |
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