| 赤羽病病毒Gc_(405aa—480aa)肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定 |
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| 引用本文： | 王建华,张俊哲,赵 丹,王玉玲,肖 妍.赤羽病病毒Gc_(405aa—480aa)肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定[J].中国动物检疫,2019,36(3):79-83. |
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| 作者姓名： | 王建华 张俊哲 赵 丹 王玉玲 肖 妍 |
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| 基金项目： | 天津市应用基础与前沿技术研究计划项目（15JCYBJC30500）；海关总署科技计划项目（2017IK125） |
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| 摘 要： | 为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa—480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体p ET-Gc_(405aa—480aa),转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达。将重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,通过Ni~+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-bloting和ELISA分析其抗原性。SDS-PAGE显示,重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段以完全可溶性形式在大肠杆菌中得到高效表达;用Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化,获得了较高纯度的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段;Western-blotting显示,该重组肽段对赤羽病病毒阳性血清具有很强的反应原性。本研究表达、纯化和鉴定了具有强抗原性的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,为进一步开展Gc蛋白单克隆抗体制备、B细胞表位鉴定和诊断试剂研制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 赤羽病病毒 Gc蛋白 重组肽段 原核表达 纯化 抗原性鉴定 |
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