重组鲢鱼抗菌肽parasinⅠ原核表达、纯化与抗菌活性 |
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引用本文: | 赵华,张艳艳,汤加勇,李珂,周继昌,王康宁.重组鲢鱼抗菌肽parasinⅠ原核表达、纯化与抗菌活性[J].动物营养学报,2012(9):1731-1736. |
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作者姓名: | 赵华 张艳艳 汤加勇 李珂 周继昌 王康宁 |
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作者单位: | 四川农业大学动物营养研究所;深圳市慢性病防治中心分子生物学实验室 |
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基金项目: | 国家863计划子项目(2007AA100601-6) |
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摘 要: | 本文旨在构建抗菌肽parasinⅠ大肠杆菌重组表达载体,表达人工重组parasinⅠ,并检测其抑菌活性。根据parasinⅠ的成熟肽序列和大肠杆菌密码子偏好性,人工合成1段57 bp的基因编码cDNA,通过PCR技术构建大肠杆菌重组表达质粒pET32-ParaⅠ,并在parasinⅠ基因5’-端引入Xa因子酶切位点。重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后,在不同温度(37和20℃)条件下对阳性转化子进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果表明:IPTG成功诱导了1个21 ku的融合蛋白表达,重组蛋白占菌体总蛋白质的45%~50%。在低温条件下产生的融合蛋白主要以可溶性形式存在。可溶性重组蛋白经亲和层析纯化后,用Χa因子进行酶切,酶切产物经琼脂孔扩散法抑菌活性检测,结果显示其对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用。本试验实现了parasinⅠ的重组表达,表达产物经Χa因子酶切后具抑菌活性。
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关 键 词: | 抗菌肽parasinⅠ 大肠杆菌 融合蛋白 表达 抑菌活性 |
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