| 结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片 |
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| 引用本文： | 杨国淋,赵松,尹人杰,黄小波,马锐,张仙,曹三杰,文翼平,伍锐.结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片[J].农业生物技术学报,2016(1):142-150. |
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| 作者姓名： | 杨国淋 赵松 尹人杰 黄小波 马锐 张仙 曹三杰 文翼平 伍锐 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学动物医学院/动物传染病与基因芯片实验室,成都,611130;2. 崇州市农村发展局,成都,611200 |
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| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项项目(No.201203056) |
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| 摘 要： | 基因芯片(gene chip)是依据核酸杂交原理发展的一种生物新技术,在生命科学研究领域具有重要的应用价值.本研究将不对称PCR和基因芯片两种技术相结合,构建了同步检测鸡(Gallus gallus)传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的共检基因芯片.分别选取ILTV的胸苷激酶(thymidine kinase,TK)和糖蛋白B(glycoproteins B,gB)基因、NDV的融合蛋白(fusion,F)和血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemagglutinin-neuraminidase,HN)基因以及IBV的膜蛋白(membrane,M)和核衣壳(nucleocapsid,N)基因设计引物,从重组质粒菌中扩增制备探针基因,用乙醇沉淀法纯化后点制于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;靶基因用cy3标记引物,进行不对称PCR扩增,扩增的荧光标记单链产物与芯片杂交.不对称PCR结果显示,当限制性引物与非限制性引物浓度比例在1:10时ILTV-TK、NDV-HN和IBV-N的单链产物增加最多,当浓度比在1:20时,ILTV-gB、NDV-F和IBV-M的单链产物增加最多;相应的标记样品与3种病毒检测芯片杂交后,均出现较强的杂交信号,而阴性对照检测不到荧光信号,灵敏性实验表明,当DNA浓度为1.8x 104拷贝时杂交仍为阳性.本研究构建的诊断基因芯片对12份临床样品进行初步应用检测,与PCR检测技术检出率基本一致.本实验所建立的联合检测基因芯片能够快速、准确、高通量的诊断NDV-IBV-ILTV,可以应用于集约化养殖业中对多种鸡疫病病毒的检测.
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| 关 键 词： | 鸡 新城疫病毒(NDV) 传染性喉气管炎病毒(ILTV) 传染性支气管炎病毒(IBV) 不对称PCR 芯片构建 |
Construction of Gene Chip for Detecting NDV-IBV-ILTV of Chicken (Gallus gallus) with Asymmetric PCR |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chicken (Gallus gallus) Newcastle disease virus (NDV) Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) Infectious bronchitis virus (IBV) Asymmetric PCR Construction of microarray |
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