| 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究 |
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| 引用本文： | 程朝飞,宫苗苗,田康乐,王勇,赵占中,史利军,李刚.基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究[J].畜牧兽医学报,2012,43(12):1925-1930. |
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| 作者姓名： | 程朝飞 宫苗苗 田康乐 王勇 赵占中 史利军 李刚 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，北京市科委项目，国家公益行业项目 |
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| 摘 要： | 原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR 2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。
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| 关 键 词： | 狂犬病病毒 基质蛋白M 原核表达 间接ELISA 磷蛋白P |
Comparative Study on the Indirect ELISA Methods Based on the Different Recombinant Proteins of Rabies Virus |
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| CHENG Chao-fei
,
GONG Miao-miao
,
TIAN Kang-le
,
WANG Yong
,
ZHAO Zhan-zhong
,
SHI Li-jun
,
LI Gang.Comparative Study on the Indirect ELISA Methods Based on the Different Recombinant Proteins of Rabies Virus[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2012,43(12):1925-1930. |
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| Authors: | CHENG Chao-fei GONG Miao-miao TIAN Kang-le WANG Yong ZHAO Zhan-zhong SHI Li-jun LI Gang |
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| Institution: | 1(1.State Key Laboratory of Animal Nutrition,Institute of Animal Science,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193,China;2.College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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