| 嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA高活性启动子的克隆 |
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| 引用本文： | 刘变芳,阿萨斯,郭蔼光.嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA高活性启动子的克隆[J].西北农业学报,2004,13(1):18-23. |
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| 作者姓名： | 刘变芳 阿萨斯 郭蔼光 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西杨凌,712100
2. 西北农林科技大学生命科学学院,分子生物学实验室,陕西杨凌,712100 |
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| 摘 要： | 将从嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA获得一段约1.4kb的DNA片段克隆进启动子探针载体pKK232-8,转化大肠杆菌HB101获得重组质粒PAS1(具有很强启动活性),可抗Cm达1 000 μg/mL.实验采用亚克隆技术,经过提取质粒、酶切、电泳、回收、连接等步骤将该有启动活性的插入片段缩小,欲获得一段有强的启动功能的最小活性片段.首先通过单酶切图谱发现该插入片段上有3个单酶切位点即kpnI、BglⅡ和PstI;再将双酶切所得各DNA片段设计为不同的方案,或直接连接,或末端补平连接,或亚克隆处理,以启动子探针质粒pKK232-8为载体,转化大肠杆菌HB101,利用氯霉素平板筛选重组质粒.结果表明,该插入片段的活性功能存在于Kpn1和HindⅢ双酶切所得的一段约300 bp的DNA片段,将该小片段进行亚克隆所得重组质粒PAS1-3仍有很强的Cm抗性.
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| 关 键 词： | 嗜麦芽假单胞菌AT18 启动子 高活性片段 亚克隆技术 |
| 文章编号： | 1004-1389(2004)01-0018-06 |
| 收稿时间： | 2003/11/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2003年11月19 |
Cloning of a High Activity Promoter from Pseudomonas Maltophilia AT18 Chromosomal DNA |
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| LIU Bian-fang,Aazaz and GUO Ai-guang.Cloning of a High Activity Promoter from Pseudomonas Maltophilia AT18 Chromosomal DNA[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2004,13(1):18-23. |
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| Authors: | LIU Bian-fang Aazaz and GUO Ai-guang |
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| Institution: | LIU Bian-fang~1,Aazaz~2,GUO Ai-guang~2 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudomonas maltophilia AT18 Promoter High activity fragment Subcloned technology |
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