| 禽流感病毒H7和N2亚型nano-dPCR检测方法的建立和应用 |
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| 引用本文： | 李丹,谢芝勋,李孟,罗思思,张民秀,谢丽基,华俊,粟永春,翟国胜,黄娇玲.禽流感病毒H7和N2亚型nano-dPCR检测方法的建立和应用[J].山西农业科学,2023(6):709-715. |
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| 作者姓名： | 李丹 谢芝勋 李孟 罗思思 张民秀 谢丽基 华俊 粟永春 翟国胜 黄娇玲 |
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| 作者单位： | 1. 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室;2. 广西金陵农牧集团有限公司 |
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| 基金项目： | 广西重点研发计划项目（桂科AB21076004）；;广西自然科学基金项目（2022GXNSFAA035445,2021GXNSFBA196031）； |
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| 摘 要： | 为建立一种同时检测H7亚型和N2亚型禽流感病毒（AIV）的双重纳米PCR(nano-dPCR)方法，从GenBank中分别下载H7亚型AIV的HA基因序列和N2亚型AIV的NA基因序列，采用Primer 7.0和Oligo 6.0软件设计了2对特异性引物，通过对nano-dPCR反应条件进行优化确定最佳反应体系；利用优化好的反应体系开展nano-dPCR方法的特异性和敏感性试验；采集活禽市场家禽咽喉及泄殖腔拭子样品进行临床样品检测并进行验证。结果表明，成功建立了一种同时检测H7亚型（723 bp）和N2亚型（314 bp）AIV的nano-dPCR方法，该方法特异性良好，其他亚型禽流感病毒及常见禽类呼吸道病毒均未出现特异性的条带，H7亚型AIV和N2亚型AIV的最低核酸检测量分别达到了5×103、5×103拷贝/μL，其敏感性是普通双重PCR检测方法的10倍，其对临床样品检测结果准确率达到100%，可以用于禽流感临床样品鉴别诊断和日常防控监测。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒 双重纳米PCR H7亚型 N2亚型 |
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