| 猪生长抑素Ⅱ型受体基因(SSTR2)shRNA的构建与筛选 |
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| 引用本文： | 杨林,刘小龙,习欠云,江青艳,徐鹏如,张永亮.猪生长抑素Ⅱ型受体基因(SSTR2)shRNA的构建与筛选[J].农业生物技术学报,2012,20(4):382-388. |
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| 作者姓名： | 杨林 刘小龙 习欠云 江青艳 徐鹏如 张永亮 |
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| 作者单位： | 1. 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,华南农业大学动物科学学院,广州510642;广东省医学实验动物中心,佛山528248
2. 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,华南农业大学动物科学学院,广州510642 |
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| 基金项目： | 广东省科技攻关项目，广东省粤港招标项目 |
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| 摘 要： | 生长激素(GH)是调控动物生长的重要激素,GH分泌水平的高低主要受正性调控因子生长激素释放因子(GRF)和负性调控因子生长抑素(SS)的双向调节。SS通过生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)发挥作用,减少GH的分泌水平。本研究设计了3条SSTR2的短发夹RNA(shRNA),构建猪(Sus scrofa)SSTR2真核表达质粒(pcDNA3.1(-)-SSTR2)和SSTR2慢病毒RNA干扰质粒(pshRNA-copGFP lentivector,LV-shRNA),并共转染中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢细胞系(CHO),通过对转染细胞的荧光观察、Real-time PCR和酶联免疫法(ELISA)检测,结果表明,CHO转染细胞中猪SSTR2 mRNA表达水平不同程度的抑制,分别为90.4%、28.3%和86.3%,(P<0.05)。其中,LV-shRNA1表现出最高的沉默效率:转染效率在80%左右时,猪SSTR2mRNA水平沉默效率为90.4%,蛋白质水平降低了33.3%。本研究成功地筛选到了降低猪SSTR2基因表达的shRNA,为利用shRNA技术下调动物基因表达,构建转基因模型提供思路。
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| 关 键 词： | RNAi SSTR2 慢病毒载体 猪 |
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