| 在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达 |
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| 引用本文： | 卢艳敏,崔海信,王承民,何宏轩.在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达[J].农业生物技术学报,2012,20(2):196-202. |
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| 作者姓名： | 卢艳敏 崔海信 王承民 何宏轩 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京100081;衡水学院生命科学系,衡水053000
2. 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京,100081
3. 中国科学院动物研究所动物生态与保护生物学院重点实验室,国家野生动物疫病研究中心,北京100101 |
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| 基金项目： | 中国科学院绿色农业技术集成与发展中心创新方向项目，战略生物资源科技支撑体系项目 |
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| 摘 要： | 抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法.
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| 关 键 词： | 抗菌肽 MagaininⅡ 口蹄疫病毒(FMDV) 2A 共表达 |
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