| 牛疱疹病毒I型ul49（VP22）基因的序列分析及其表达 |
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| 引用本文： | 余晓岚,肖少波,方六荣,金梅林,陈焕春.牛疱疹病毒I型ul49（VP22）基因的序列分析及其表达[J].畜牧市场,2009(10):21-23. |
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| 作者姓名： | 余晓岚 肖少波 方六荣 金梅林 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学畜牧兽医学院,湖北武汉430070 |
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| 摘 要： | 以牛疤疹病毒I型（BHV—I）国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板，扩增出大小约0．77kb的ul49基因完整编码区片段，将扩增片段克隆到pMD18-T载体中，获得含ul49基因的重组质粒pMD—VP22。采用双脱氧末端终止法进行序列测定，发现与国外Cooper株ul49基因序列完全一致，说明ul49基因相当保守。进一步将BHV—lul49完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP—C1中，获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22。将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，SDS—PAGE电泳检测发现在58kDa处有一条特异性的表达带。利用脂质体介导，将pEGFPVP22转染PK-15细胞，经G418加压筛选，获得稳定表达VP22的细胞克隆。在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞，发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中，而对照载体pEGFP—C1转染细胞的荧光分布于胞浆。
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| 关 键 词： | 牛疤疹病毒I型 ul49基因 克隆 序列分析 表达 |
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