| 半滑舌鳎生长激素及其受体基因的原核表达 |
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| 引用本文： | 马骞,柳淑芳,庄志猛,唐启升.半滑舌鳎生长激素及其受体基因的原核表达[J].中国水产科学,2012,19(6):956-962. |
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| 作者姓名： | 马骞 柳淑芳 庄志猛 唐启升 |
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| 作者单位： | 山东省渔业资源与生态环境重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30871913,31201981);山东省泰山学者工程专项(2009.03—2014.02);山东省自主创新成果转化重大专项(2009ZHZX1A1201) |
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| 摘 要： | 根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSGHR1-2质粒在70 kD处发现诱导的蛋白条带,其表达量分别占细胞蛋白总量的37.6%和20.2%;而构建的pGEX-6P-1-CSGH重组质粒和含有GHR-Ⅰ基因跨膜区的重组质粒(pET-32a-CSGHR1-1、pET-32a-CSGHR1-2和pGEX-6P-1-CSGHR1-1)均未获得表达产物。由此可见,半滑舌鳎GHR-Ⅰ基因的跨膜区可能影响其在大肠杆菌中的表达。研究结果为实现半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ制剂的开发及应用于养殖生产实践奠定基础。
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| 关 键 词： | 半滑舌鳎 生长激素基因 生长激素受体Ⅰ基因 原核表达 |
| 修稿时间： | 2012/11/21 0:00:00 |
Prokaryotic expression of growth hormone and its receptor genes in the tongue sole (Cynoglossus semilaevis) |
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| MA Qian,LIU Shufang,ZHUANG Zhimeng,TANG Qisheng.Prokaryotic expression of growth hormone and its receptor genes in the tongue sole (Cynoglossus semilaevis) [J].Journal of Fishery Sciences of China,2012,19(6):956-962. |
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| Authors: | MA Qian LIU Shufang ZHUANG Zhimeng TANG Qisheng |
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| Institution: | Key Laboratory for Fishery Resources and Eco-environment,Yellow Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Qingdao 266071,China |
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| Abstract: | tonguesole()weresub-clonedintotheexpressionvectorspET-32aandpGEX-6P-1,respectively.Subsequently,thesesodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE).Asaresult,anewspecificGHbandexpressedbyusingthepET-32avector(pET-32a-CSGH)wasfoundwithmolecularmassofabout40kD,andanewspecificGHR-bandexpressedbyusingthepGEX-6P-1vector(pGEX-6P-1-CSGHR1-2)wasfoundwithmolecularmassofabout70kD.TheGHandGHR-recombinantproteinswereexpressedandcomposedof37.6%and20.2%ofthetotalbacterialproteins,respectively.However,pGEX-6P-1-CSGHandtheotherthreerecombinantplasmids(pET-32a-CSGHR1-1,pET-32a-CSGHR1-trans-membranedomainwerenotsuccessfullyexpressed.Therelevantresultsshowedthatthetrans-membranedomainoftheGHR- |
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| Keywords: | Cynoglossus semilaevis growth hormone gene growth hormone receptor I gene prokaryotic expression |
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