| 牛FADD基因过表达和RNAi载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 赵茂鑫,于海滨,李傲楠,赵志辉,杨润军,芦春艳.牛FADD基因过表达和RNAi载体构建及在牛胎儿成纤维细胞中的表达[J].吉林农业大学学报,2014(2):199-204,212. |
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| 作者姓名： | 赵茂鑫 于海滨 李傲楠 赵志辉 杨润军 芦春艳 |
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| 摘 要： | FADD(Fas-associated death domain protein)存在于Fas/FasL系统中,是信号传导通路的一个信号连接蛋白,FADD通过传递凋亡信号,从而介导细胞凋亡。为进一步验证FADD基因抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,从牛卵巢组织中扩增FADD基因,将FADD基因连接到带有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建过表达FADD基因载体,并构建FADD基因的RNAi载体;用脂质体介导法将FADD基因RNAi载体、真核表达载体转染到牛胎儿成纤维细胞中,观察有无荧光的表达,并使用Real-Time qPCR和Western blot方法检测FADD基因mRNA、蛋白水平的表达情况。结果表明:成功构建出FADD基因RNAi载体和高表达载体,重组质粒转染牛胎儿成纤维细胞24 h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,转染效率可达50%。
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