| 猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达 |
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| 作者单位： | 赵俊龙（华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070）;陈焕春（华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070）;吕建强（华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070）;肖少波（华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070）;周复春（华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070） |
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| 基金项目： | 国家九五重中之重课题(96-003-01-041);湖北省自然科学基金资助(99J100). |
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| 摘 要： | 利用PCR技术从猪细小病毒的RF
DNA模板中扩增了含有VP2全基因的2.0 kb的基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体,利用双脱氧末端终止法测定了VP2全基因的核苷酸序列.将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较,同源性均在99%以上,从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性.将VP2全基因分别克隆入原核表达载体pET15(b)、pET17(b)和pET28(b)构建成表达质粒pET15bVP2、pET17bVP2和pET28bVP2;将含有VP2基因起始位点至EcoRⅠ切点间的0.8
kb片段克隆入pET17(b)中构建成表达质粒pET17bVP2f.利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现pET17bVP2f质粒在45
kD处有一特异性表达带,而其它几种质粒均未看到特异性表达带,推测VP2基因3′端的某些结构可能对VP2全基因的表达有一定影响.这一结果对研究VP2基因的结构与功能具有重要意义.
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| 关 键 词： | 猪细小病毒 VP2基因 基因克隆 序列分析 原核表达 |
| 文章编号： | 0366-6964(2003)02-0195-04 |
| 修稿时间： | 2002年1月4日 |
Study on Clone,Sequence Analysis and Expression of Porcine Parvovirus VP2
Gene |
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