| 南瓜RAPD分析体系的优化* |
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| 引用本文： | 周 辉,赵福宽,林 成,高遐虹,程继鸿.南瓜RAPD分析体系的优化*[J].云南农业大学学报,2005,20(2):172-178. |
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| 作者姓名： | 周 辉 赵福宽 林 成 高遐虹 程继鸿 |
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| 作者单位： | 北京农学院植物科技系，北京农学院植物科技系，新疆农业大学园艺学院，北京农学院植物科技系，北京农学院植物科技系 北京102206，北京102206，新疆乌鲁木齐830052，北京102206，北京102206 |
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| 基金项目： | 北京市教委和农业应用新技术北京市重点实验室资助项目。 |
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| 摘 要： | 为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性，对MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜 RAPD反应体系为25 μL反应液中：10×反应 buffer（100 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L KCl, 80 mmol/L (NH4)2SO4 ,pH 9.0,NP-40）2.5 μL, 3 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dNTPs，Taq酶l.0 U,引物15 ng/μL ，DNA模板10 ng/μL 。本研究最终确立的PCR反应程序为: 94 ℃预变性5 min,然后按94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s，进行40个循环,最后72 ℃延伸5 min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。
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| 关 键 词： | 南瓜 RAPD 反应体系 |
| 文章编号： | 1004-390X(2005)02-0172-07 |
| 收稿时间： | 2004-11-9 |
Optimization of RAPD Analysis System in Squash |
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| ZHOU Hui,ZHAO Fu-kuan,LIN Cheng,GAO Xia-hong,CHENG Ji-hong.Optimization of RAPD Analysis System in Squash[J].Journal of Yunnan Agricultural University,2005,20(2):172-178. |
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| Authors: | ZHOU Hui ZHAO Fu-kuan LIN Cheng GAO Xia-hong CHENG Ji-hong |
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| Institution: | ZHOU Hui~1,ZHAO Fu-kuan~1,LIN Cheng~2,GAO Xia-hong~1,CHENG Ji-hong~1 |
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| Abstract: | The optimum reaction system of RAPD in squash was studied in order to ensure stability and reproducibility of RAPD. After testing some important influencing factors of RAPD in squash such as MgCl2, dNTPs, Taq DNA polymerase,primer, template DNA,the temperature for annealing and the number of cycles,the results showed that in 25 μL RAPD reaction system the optimum concentration were 3 mmol/L MgCl2, 0.2 mmol/L dNTPs, Taq DNA polymerase 1.0 U, primer 15 ng/μL,template DNA 10 ng/μL. The PCR amplification procedure used in this study was as follow : pre-denature at 94 ℃ for 5 min, then 94 ℃ 30 s,37 ℃ 30 s 72 ℃ 90s,for 40 cycles, finally extended at 72 ℃ for 5 min. The results also indicated that the optimized conditions of RAPD could provide an effective means for the research of genetic diversity, molecular marker and auxiliary breeding in squash. |
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| Keywords: | squash RAPD reaction system |
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