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| 用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用 | |
| 引用本文： | 吴光辉,王庆,巩华,石存斌,李华,吴淑勤.用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用[J].大连水产学院学报,2010,25(3):233-237. |
| 作者姓名： | 吴光辉 王庆 巩华 石存斌 李华 吴淑勤 |
| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380;大连海洋大学,生命科学与技术学院,辽宁,大连,116023 2. 中国水产科学研究院,珠江水产研究所,广东,广州,510380 3. 大连海洋大学,生命科学与技术学院,辽宁,大连,116023 |
| 基金项目： | 国家"863"计划项目，农业公益性行业科研专项 |
| 摘 要： | 采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western blotting）进行分析检测。结果表明：采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示：鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。 |
| 关 键 词： | 鲫 ProteinA IgM 纯化 抗体检测 |
Rapid purification of serum IgM from crucian carp,Carassius auratus by Protein A agarose affinity chromatography |
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| WU Guang-hui,WANG Qing,GONG Hua,SHI Cun-bin,Li Hua,WU Shu-qin.Rapid purification of serum IgM from crucian carp,Carassius auratus by Protein A agarose affinity chromatography[J].Journal of Dalian Fisheries University,2010,25(3):233-237. | |
| Authors: | WU Guang-hui WANG Qing GONG Hua SHI Cun-bin Li Hua WU Shu-qin |
| Institution: | WU Guang-hui1,2,WANG Qing1,GONG Hua1,SHI Cun-bin1,Li Hua2,WU Shu-qin1(1.Pearl River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Guangzhou 510380,China,2.College of Life Science , Technology,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China) |
| Abstract: | In present study,serum IgM from crucian carp,Carassius auratus,was purified rapidly using affinity chromatography with Protein A Agarose and then analyzed by SDS-PAGE.The results showed that high purity of serum IgM was separated using affinity chromatography technique,and about 85 000 of heavy chain and 25 000 of light chain was clearly detected in the IgM by SDS-PAGE without any other obvious bands.High titer of antisera which can detect heavy chain of IgM was obtained in kunming mice injected the purifie... |
| Keywords: | Protein A IgM |
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