摘 要: | 利用反转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆青鳉(Oryzias latipes)肠道组织蛋白酶E(cathepsin E,CtpE)基因全长cDNA序列,并分析青鳉组织蛋白酶(OlCtpE)的功能。结果显示:OlCtpE基因cDNA(GenBank登录号:KP864679)全长1 301 bp,其中5'端非翻译区24 bp,3'端非翻译区56 bp,开放阅读框1 221 bp,编码406个氨基酸;OlCtpE蛋白N端含有一个由17个氨基酸组成的信号肽,属于分泌蛋白;同源比对显示,OlCtpE蛋白由2个以活性位点"DTGT"为催化中心的同源结构域组成,对称分布的2个保守的催化中心形成"催化二联体";三级结构分析显示,负责底物固定的"活性中心翼环"延伸到活性部位上,活性部位的发夹式裂隙可以为底物与酶的契合提供空间。
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