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| 小反刍兽疫病毒P蛋白及非结构蛋白V表达特性研究 | |
| 作者单位： | ;1.云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;2.云南农业大学动物医学院 |
| 摘 要： | 从小反刍兽疫病毒全长c DNA中对磷酸化蛋白P及其编码的非结构蛋白V基因进行特异扩增,PCR产物回收后分别连接于T载体酶切及测序分析后,将其亚克隆至真核载体pEGFP-N2及原核表达载体pET32a,获得的真核表达质料命名为pEGFP-P、pEGFP-RV与空载体对照转染Vero细胞,经浓度为800μg/μL G418筛选后获得均一表达,荧光定位观察表明P蛋白与V蛋白的表达并不相同,P蛋白严格定位于细胞浆,而V蛋白则能在胞浆及胞核内观察到;获得原核表达质粒pET32a-P和pET32a-RV在37℃通过条件优化后以1.0 mmol/L IPTG诱导后分别收获细胞上清及沉淀用于SDS-PAGE及Western Blot对重组P、V蛋白的检测,结果表明,重组P蛋白为90 ku,重组V蛋白为55 ku的可溶性融合蛋白,可溶性表达产物经500 mmol/L咪唑两次纯化后获得80%以上纯度的表达,纯化得到的蛋白免疫兔子后能产生特异性抗体。 |
| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 P/V蛋白 细胞定位 原核表达 |
Expression of P/V Gene of Peste des Petits Ruminants Virus and the Studies of the Biological Characteristics |
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