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| 旋毛虫成虫DNaseⅡ—T3223-7基因的克隆及其表达特性鉴定 | |
| 作者单位： | ;1.吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室;2.中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所;3.河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室 |
| 摘 要： | 利用RT-PCR技术从旋毛虫成虫得到T3223-7基因,并进行扩增克隆到原核克隆载体pMD18-T中,将重组质粒转入克隆菌DH5α,提取质粒进行酶切和测序鉴定,连接至pET-28a表达载体,最后转入表达菌Rosetta(DE3)。用1mmol/L IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,发现重组蛋白以包涵体的形式表达,约为40 000,与理论值相符。将纯化后的重组蛋白免疫家兔,制备兔抗T3223-7蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价达1∶320 000,Western blot检测表明制备的多克隆抗体能与T3223-7抗原发生特异性反应,并能识别和结合旋毛虫成虫排泄分泌物(ES)。 |
| 关 键 词： | 旋毛虫 原核表达 多克隆抗体 DNaseⅡ |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |