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菌丝霉素NZ2114基因在毕赤酵母中表达及中试发酵研究
摘    要:构建表达菌丝霉素NZ2114蛋白的真核重组表达质粒p Pic Zα-NZ2114,并转化毕赤酵母菌GS115,Zeocin抗性筛选阳性重组子,通过PCR鉴定、Tricine-SDS-PAGE分析和琼脂孔穴扩散法筛选获得菌丝霉素NZ2114组成型表达菌株,并采用p H-溶氧监控策略进行工程菌毕赤酵母菌GS-115/p Pic Zα-NZ2114的50 L中试发酵研究。结果表明,本实验成功实现了菌丝霉素NZ2114基因在毕赤酵母GS115中的组成型表达p Pic Zα-NZ2114,Tricine-SDS-PAGE分析显示,在4.4 k Da处有明显的目的条带,工程菌经50 L发酵罐诱导培养96 h后取上清,对金黄色葡萄球菌CMCC26003有明显的抑制作用。菌丝霉素NZ2114基因在毕赤酵母中表达的方法在本研究中成功应用,中试研究为以后的规模化生产和应用奠定了基础。

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