| 病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 |
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| 引用本文： | 段燕喻,陈茹,吴晓薇,朱道中,林志雄,田纯见,刘志玲.病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备[J].中国动物检疫,2018,35(2):102-107. |
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| 作者姓名： | 段燕喻 陈茹 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲 |
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| 作者单位： | 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家质检总局科技项目（2016IK047） |
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| 摘 要： | 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。
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| 关 键 词： | 病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质 |
Preparation of Reference Materials Used for Detecting Nucleic Acids of Nervous Necrosis Virus |
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| Duan Yanyu,Chen Ru,Wu Xiaowei,Zhu Daozhong,Lin Zhixiong,Tian Chunjian,Liu Zhiling.Preparation of Reference Materials Used for Detecting Nucleic Acids of Nervous Necrosis Virus[J].China Journal Of Animal Quarantine,2018,35(2):102-107. |
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| Authors: | Duan Yanyu Chen Ru Wu Xiaowei Zhu Daozhong Lin Zhixiong Tian Chunjian Liu Zhiling |
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