| 发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化 |
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| 引用本文： | 杜东霞,尹红梅,张德元,刘标,许隽,王震,贺月林.发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化[J].农业环境科学学报,2014,31(5):470-475. |
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| 作者姓名： | 杜东霞 尹红梅 张德元 刘标 许隽 王震 贺月林 |
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| 作者单位： | 湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009,湖南省微生物研究院,湖南 长沙 410009 |
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| 基金项目： | 湖南省农业产业技术体系“湖南省生猪产业技术体系生猪产业规模养殖与环境控制岗位” |
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| 摘 要： | 为探讨发酵床垫料中微生物16S rDNA基因扩增实验中诸多因素对实验结果的影响,采用单因素法对16S rDNA基因扩增时PCR反应体系中的5个潜在因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、模板DNA)5水平上进行优化实验,并进一步优化了反应程序中的退火温度、循环次数。结果表明:25μL的最佳反应体系为:10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 50 ng;最佳反应程序为:在94℃下进行4 min预变性;随后循环扩增25个循环(包括94℃变性45 s,53.7℃退火30 s,72℃延伸90 s);最后在72℃下延伸10 min。
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| 关 键 词： | 发酵床垫料 16SrDNA 单因素法 退火温度 |
| 收稿时间： | 2014/4/24 0:00:00 |
Establishment and Optimization of Microbial 16S rDNA PCR Reaction Conditions in Fermentation Bed Padding Material |
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| DU Dong-xi,YIN Hong-mei,ZHANG De-yuan,LIU Biao,XU Jun,WANG Zhen and HE Yue-lin.Establishment and Optimization of Microbial 16S rDNA PCR Reaction Conditions in Fermentation Bed Padding Material[J].Journal of Agro-Environment Science( J. Agro-Environ. Sci.),2014,31(5):470-475. |
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| Authors: | DU Dong-xi YIN Hong-mei ZHANG De-yuan LIU Biao XU Jun WANG Zhen and HE Yue-lin |
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| Institution: | Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China,Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China,Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China,Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China,Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China,Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China and Hunan Academy of Microbiology,Changsha 410009,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | fermentation bed padding material 16S rDNA single factor experiment annealing temperature |
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