| 表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 付宁宁,肖长广,陈梦莉,邱亚峰,李宗杰,李蓓蓓,刘珂,邵东华,马志永,魏建超.表达PRRSV N蛋白稳定细胞系的构建与鉴定[J].畜牧与兽医,2023(12):105-110. |
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| 作者姓名： | 付宁宁 肖长广 陈梦莉 邱亚峰 李宗杰 李蓓蓓 刘珂 邵东华 马志永 魏建超 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所;2. 南京农业大学动物医学院 |
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| 摘 要： | 旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白的Marc-145细胞系。以PRRSV SH1株感染性克隆质粒为模板，通过PCR扩增N基因，并将其克隆到慢病毒载体中，获得重组慢病毒质粒pSin-Ires-Puro-N,将重组质粒pSin-Ires-Puro-N与辅助质粒psPAS2、pMD2.G、pRSV-Rev共转染293T细胞进行慢病毒包装，获得表达N蛋白的重组慢病毒颗粒并将其感染Marc-145细胞，嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，筛选几代后的细胞采用有限稀释法和终点稀释法获得稳定表达N蛋白的Marc-145细胞系。通过PCR鉴定表明细胞系中存在N蛋白基因，通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验验证N蛋白能在细胞系中能稳定表达。本研究成功构建了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系，为研制PRRSV新型复制缺陷型疫苗奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 细胞系 稳定表达 慢病毒载体 |
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