| 微滴式数字PCR定量检测禽偏肺病毒方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 谢志勤,谢芝勋,张艳芳,范晴,谢丽基,万丽军,罗思思,李孟,张民秀,曾婷婷,黄娇玲,王盛,李丹,韦悠,李小凤,任红玉,阮志华.微滴式数字PCR定量检测禽偏肺病毒方法的建立[J].中国预防兽医学报,2023(3):264-270. |
| |
| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 张艳芳 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 李小凤 任红玉 阮志华 |
| |
| 作者单位： | 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室,农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 广西重点研发计划(桂科AB16380003)； |
| |
| 摘 要： | 为建立禽偏肺病毒(aMPV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法，本研究以aMPV F基因为靶基因，根据其保守区域设计特异性引物和探针，通过各反应条件的优化，初步建立检测aMPV的dd PCR方法。反应条件优化结果显示，最佳引物终浓度1μmol/μL，探针终浓度0.5μmol/μL，退火温度56℃。绘制的标准曲线显示，重组质粒标准品稀释倍数的对数与相应质粒检出拷贝数的对数呈良好的线性关系(R2=0.999 8)。采用该方法同时检测aMPV、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽呼肠孤病毒、禽脑脊髓炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和禽腺病毒，结果显示，仅aMPV检测为阳性，其他病原均为阴性。特异性较强。将p MD18-aMPV重组质粒标准品10倍倍比稀释(105～109,4.3×103拷贝/μL～4.3×10-1拷贝/μL)后作为模板，采用该方法检测，结果显示该方法对重组质粒标准品的检测限为4.3拷贝/μL，比荧光定量PCR (qPCR)检测限(43拷贝/μL)敏感。对3个稀释度质粒标准品...
|
| 关 键 词： | 微滴式数字PCR 定量检测 禽偏肺病毒 |
|
|
