| 猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备 |
| |
| 引用本文： | 田淑婧,陈羽彤,陆春秀,苏春宇,吕其壮.猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备[J].福建农业学报,2023(8):894-900. |
| |
| 作者姓名： | 田淑婧 陈羽彤 陆春秀 苏春宇 吕其壮 |
| |
| 作者单位： | 1. 玉林师范学院生物与制药学院;2. 广西农产资源化学与生物技术重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31860708）； |
| |
| 摘 要： | 【目的】克隆猪c-Myc基因CDS序列并构建其原核表达载体，同时纯化c-Myc蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体，为进一步研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep蛋白与宿主c-Myc蛋白之间的交互作用奠定基础。【方法】根据猪c-Myc全基因序列(GenBank No. NM＿001005154)设计引物，以反转录PCR方法扩增c-Myc基因CDS序列，经Nde I/Xho I双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)；转化至Arctic-ExpressTM大肠杆菌后诱导表达；表达产物经变性、复性和His-Band Ni+层析柱亲和纯化后免疫新西兰白兔。抗原亲和层析法纯化抗体后，用间接ELISA法测定其效价，用Western blot检测其特异性。【结果】经检测，克隆产生的猪c-Myc基因CDS序列长度为1 359 bp,c-Myc-His重组蛋白主要以包涵体形式出现，分子质量约为63 kDa，由此蛋白制备的多抗效价可以达到1∶1 093 500，并能特异性识别猪c-Myc蛋白和重组蛋白c-Myc-His。【结论】...
|
| 关 键 词： | 猪c-Myc蛋白 原核表达与纯化 多克隆抗体 |
|
|
