| 猪Jiv90基因打靶载体的构建与细胞转染试验 |
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| 引用本文： | 李宇立,张彦明,程 敏.猪Jiv90基因打靶载体的构建与细胞转染试验[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(10):1-9. |
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| 作者姓名： | 李宇立 张彦明 程 敏 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院;西北农林科技大学 动物医学院;西北农林科技大学 动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家转基因培育新品种专项“抗病转基因猪新品种培育”（2009ZX08006-006B）；陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项“猪瘟病毒致病机理与抗病育种研究”（2009ZDKG-23） |
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| 摘 要： | 【目的】构建猪Jiv90基因的同源打靶载体,并转染猪血管内皮细胞系(SUVEC),对Jiv90基因的敲除效果进行初步验证。【方法】根据NCBI中公布的Jiv90基因序列,克隆得到Jiv90基因核心区两侧的基因序列,并以此为长短臂,构建了可定点敲除Jiv90基因的打靶载体。用该载体转染SUVEC,通过新霉素(G418)和丙氧鸟苷(GANC)的筛选得到稳定的细胞株,再利用PCR检测neo基因在细胞基因组上的整合情况,最后对筛选得到的neo阳性细胞进行猪瘟病毒(CSFV)感染试验,并用实时定量PCR(Real-time PCR)检测CSFV的增殖情况。【结果】以提取所得品质良好的SUVEC全基因组DNA为模板,克隆得到了针对Jiv90基因打靶的核心区两侧基因序列,基因片段长度分别为4 522bp和1 944bp。将长短臂与打靶骨架载体pA2T相连后,构建了关于猪Jiv90基因的同源打靶载体JKS。用JKS载体转染SUVEC,通过1 500μg/mL G418和200nmol/mL GANC正负筛选,得到了稳定转染JKS载体的SUVEC。对于稳定筛选后的试验组细胞,感染CSFV并进行Real-time PCR,结果表明,正常细胞中的CSFV核酸含量是转染JKS载体细胞的3.65倍。【结论】成功扩增了针对猪Jiv90基因的同源长短臂,并构建了猪Jiv90基因的打靶载体JKS,敲除Jiv90基因细胞中的CSFV核酸片段含量显著降低,说明Jiv90基因的敲除可降低细胞中猪瘟病毒的增殖量。
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| 关 键 词： | 猪血管内皮细胞 Jiv90基因 打靶载体 细胞转染 猪瘟病毒 |
| 收稿时间： | 4/6/2011 12:00:00 AM |
Construction and cell transfection of the targeting vectors of Jiv90 genes in swine |
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| LI Yu-li,ZHANG Yan-ming,CHENG Min,YANG You-cong.Construction and cell transfection of the targeting vectors of Jiv90 genes in swine[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(10):1-9. |
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| Authors: | LI Yu-li ZHANG Yan-ming CHENG Min YANG You-cong |
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| Institution: | LI Yu-li,ZHANG Yan-ming,CHENG Min,YANG You-cong(College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | swine umbilical vein endothelial cells Jiv90 genes targeting vectors cell transfection classical swine fever virus |
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