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猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达
引用本文:孙 岩,胡 健,温俊歌.猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(9):1-6.
作者姓名:孙 岩  胡 健  温俊歌
作者单位:西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室,兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室,生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组;西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室,兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室,生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组;西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室,兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室,生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组
基金项目:国家自然科学基金项目(30270342,31072115)
摘    要:【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。

关 键 词:猪PKR基因  克隆  原核表达  真核表达
收稿时间:2011/4/15 0:00:00

Cloning and vector construction of porcine lymph node PKR gene and its primary expression
SUN Yan,HU Jian,WEN Jun-ge,GAO Yuan,BO Lian-feng, XU Zhi-kun,WU Yao-li,ZHANG De-li.Cloning and vector construction of porcine lymph node PKR gene and its primary expression[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(9):1-6.
Authors:SUN Yan  HU Jian  WEN Jun-ge  GAO Yuan  BO Lian-feng  XU Zhi-kun  WU Yao-li  ZHANG De-li
Institution:SUN Yan,HU Jian,WEN Jun-ge,GAO Yuan,BO Lian-feng,XU Zhi-kun,WU Yao-li,ZHANG De-li(Investigation Group of Molecular Virology,Immunology,Oncology & Systems Biology,Center for Bioinformatics,and MOA Key Laboratory of Animal Biotechnology of National Ministry of Agriculture,Institute of Veterinary Immunology,and Research Laboratory of Virology,Immunology & Bioinformatics,Division of Veterinary Microbiology & Virology,Department of Preventive Veterinary Medicine,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F U...
Abstract:
Keywords:PKR gene  cloning  prokaryotic expression  eukaryotic expression
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